Desarrollo de un Dotblot para la detección de δ-endotoxinas Cry1Aa de Bacillus thuringiensis var. kurstaki en un medio de cultivo

Resumen

Bacillus thuringiensis var. kurstaki (Btk) es el principal agente de control biológico de lepidópteros. Su producción como bioinsecticida requiere de medios de cultivo que permitan el crecimiento de la bacteria y la obtención de la δ-endotoxina contenida en su cristal parasporal. En Venezuela, el desarrollo de metodologías que permitan evaluar la capacidad de Btk para producir cristales tóxicos ha sido limitado. Por este motivo, se planteó diseñar una prueba que permita detectar las δ-endotoxinas, durante el desarrollo de un cultivo de Btk a través de inmunoensayos. Para ello, la proteína Cry1Aa purificada se empleó para la producción de un suero hiperinmune en modelo lepórido. La cinética de anticuerpos fue monitoreada a través de un ELISAi, y el reconocimiento específico de la proteína por parte del suero fue verificado mediante Western blot y Dot blot. Finalmente, se evaluó la cinética de la síntesis de la proteína Cry1Aa, evidenciándose el incremento progresivo en el reconocimiento de esta proteína hasta la fase estacionaria del cultivo. Así, se logró la optimización de un método sencillo y reproducible para el seguimiento de la cinética de producción de esta δ-endotoxina en un cultivo de Btk, lo que contribuirá
en la evaluación de escalamientos en la producción de bioinsecticida.