Estudio sobre el posible papel de los linfocitos t reguladores en el establecimiento de la respuesta inmune in vitro contra la vacuna BCG en niños infectados por VIH bajo tratamiento antirretroviral de alta eficiencia

Abstract

Se estima que en la actualidad más de 33 millones de personas se encuentran infectadas por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH), de los cuales 2,5 millones corresponden a niños menores de 15 años. El VIH infecta principalmente a las células TCD4+, generando una profunda disfunción en el sistema inmune de los individuos infectados, haciéndolos más susceptibles a enfermedades oportunistas como la Tuberculosis. El Bacilo de Calmette-Guérin (BCG) es una vacuna de una cepa atenuada de Mycobacterium bovis y es la única disponible para la prevención de la Tuberculosis, sin embargo, se ha observado un incremento en el número de complicaciones asociadas a esta vacunación, especialmente en niños infectados por el VIH. La introducción del Tratamiento Antirretroviral de Alta Eficacia (TAAE) ha conllevado a una importante disminución en la mortalidad y la morbilidad en individuos VIH+, se ha observado una disminución en el desarrollo de enfermedades oportunistas en estos pacientes. Por otra parte, los linfocitos T reguladores (Treg) son una subpoblación de células TCD4+ con función supresora de la respuesta inmune in vivo e in vitro, y juegan un papel importante en el organismo, controlando la activación del sistema inmune. Sin embargo, los estudios hechos sobre estas células en la infección por el VIH han arrojado resultados contradictorios y poco se conoce sobre su papel en el establecimiento de la respuesta inmune contra la vacuna BCG. Es por ello que decidimos estudiar el posible papel de los linfocitos Treg en el establecimiento de la respuesta inmune in vitro contra la vacuna BCG en niños infectados por el VIH bajo administración del TAAE durante 22 meses. Para ello se procedió a la realización de diferentes ensayos ex vivo e in vitro. Se procedió a la determinación del número de células TCD4+ y TCD8+ de sangre (Totales, vírgenes y memoria), la frecuencia ex vivo de apoptosis en células TCD4+, como también la expresión ex vivo de moléculas asociadas a este proceso. Asimismo, para el estudio de la funcionalidad in vitro de células Treg se aplicó un protocolo nuevo para su purificación y se realizaron cultivos de Células Mononucleares de Sangre Periférica (CMSP) en presencia o ausencia de Treg autólogas. Seguido se determinó la producción de citocinas Th1 y Th2 en sobrenadantes de cultivos de CMSP, como también la producción intracelular de IFN-_ y la proliferación in vitro de células TCD4+. Encontramos que la administración del TAAE normaliza algunos parámetros y funciones de las células TCD4+. Particularmente se observó un incremento en el número de células TCD4+ y TCD8+, como también la disminución de moléculas inductoras de apoptosis e incremento de la expresión de moléculas asociadas a la sobrevivencia celular. En conjunto se observó un decremento en la frecuencia de apoptosis de células TCD4+. Por otra parte, no se observaron cambios en la producción intracelular de IFN-_ en células TCD4+ y en sobrenadantes de CMSP, sin embargo, se alcanzó normalizar la producción de citocinas Th1 y Th2, particularmente la IL-6, IL-10 y TNF-_ alcanzaron valores similares a lo observado en niños sanos. Asimismo, incrementó la capacidad de proliferación de las células TCD4+ en presencia de antígenos virales y la vacuna BCG. Por último, nuestros resultados indican que no hubo cambios significativos en los cultivos de CMSP en presencia de células Treg durante los 22 meses del estudio, indicando que la infección pediátrica por el VIH genera una profunda disfunción en estas células. Estos resultados pueden arrojar luces para entender de mejor manera la inmunopatología de la infección pediátrica por el VIH, indicando que es favorable vacunar con BCG a estos niños siempre y cuando se encuentren en un protocolo estricto de antirretrovirales.