“Optimización y validación de un método analítico por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) con detección U.V a ser aplicado en el ensayo de disolución de silimarina cápsulas”

Abstract

La silimarina es un flavonolignano extraído de la planta Silybum marianum (cardo mariano), perteneciente a las familias de las Asteraceae. Es de origen mediterráneo que crece espontánea en zonas baldías de Europa, Norte de África y el Medio Oriente y en algunas partes de USA. Los frutos del cardo mariano contienen glucósidos, lípidos, prótidos, esteroles y se ha comprobado que se trata de una mezcla de varios componentes de estructura química semejante. Estos compuestos reciben el nombre de silibinina (en mayor proporción), silidianina, silicristina e isosilibinina. La silimarina es empleada por la medicina alternativa complementaria en tratamientos de enfermedades hepáticas. Clínicamente se ha sugerido que tiene efecto hepatoprotector en varias forma de hepatitis toxica, hígado graso, cirrosis, hepatitis virales y actividad antioxidante. El presente trabajo tiene como objetivo la optimización y validación de un método analítico por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) para su aplicación en el ensayo de disolución de un producto farmacéutico nacional en cápsulas conteniendo silimarina. Para la optimización del método se evaluaron dos tipos de solventes orgánicos, sistemas de gradientes de elución y velocidad de flujo. Las condiciones óptimas se consiguieron utilizando una columna de fase reversa Lichrospher 100 RP18 25 cm de longitud, 4,0 mm de diámetro interno y tamaño de partícula 10μ, un gradiente de elución: (0 – 20) minutos 57%A : 43%B flujo de 0,5mL/min; (21 – 40) minutos 52%A : 48%B, flujo de 0,8 mL/min; (41 – 45) minutos 57%A : 43%B, flujo de 0,5 mL/min, empleando como solvente A: Solución de ácido fosfórico 0,05 M pH 3,0; solvente B: metanol, detector U.V a una longitud de onda de 288nm, un volumen de inyección de 50 µL, y bajo estas condiciones se realizó la validación de la metodología analítica. Se demostró que el método cumple con los parámetros de validación establecidos: Especificidad: es capaz de separar los compuestos de interés sin que exista interferencia de otras sustancias. Linealidad: la curva de calibración fue lineal en el rango de 40 – 140% de la concentración estándar de trabajo. Precisión: RSD a los 15 y 45 minutos menor al 10%. Precisión Intermedia: RSD a los 15 y 45 minutos menor al 15%. Exactitud: porcentaje de recuperación del analito para los 15 minutos entre 91 y 104% y para los 45 minutos entre 95 y 101%. Límite de detección: 6,46 x 10 -11 mg/mL. Límite de cuantificación: 1,95 x 10 -10 mg/mL. La precisión intermedia demostró la fortaleza del método analítico al no ser afectado por la variabilidad operacional y ambiental. El presente trabajo representa una mejora en los tiempos de análisis y precisión de los resultados analíticos de la cuantificación del producto Silimarina, con respecto al procedimiento objeto de estudio.