Diagnóstico molecular de Aneuploidías en los cromosomas:13,16,18 y 21, mediante la reacción en cadena de la polimerasa por fluorescencia cuantitativa (QF-PCR)

Abstract

Resumen El término aneuploidía se refiere a la variación numérica de los cromosomas, en el caso de los seres humanos puede consistir en un aumento o disminución del número de cualquiera de los 23 pares de cromosomas. La presencia de una aneuploidía puede generar manifestaciones clínicas, físicas o psíquicas muy graves, y han sido identificadas como responsables de una gran porción de abortos espontáneos.Clásicamente las aneuploidías han sido estudiadas mediante cariotipo e hibridación fluorescente in situ (FISH). A partir del año 2000 se comienzan, a gran escala, los estudios de aneuploidías mediante la reacción en cadena de la polimerasa por fluorescencia cuantitativa (QF-PCR por sus siglas en inglés). La QF-PCR consiste en la amplificación y cuantificación de las variantes genéticas presentes en regiones específicas del ADN (STRs o Short Tándem Repeat) por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), utilizando cebadores marcados con fluorescencia, que permiten que un secuenciador de ADN de electroforesis capilar, registre los fragmentos productos de la PCR como picos de excitación en un gráfico denominado electroferograma. El objetivo de este trabajo de tesis fue el estudio de aneuploidías en muestras de restos abortivos y líquido amniótico mediante la selección y diseño de cebadores para regiones repetitivas tipo Short Tándem Repeats en los cromosomas 13, 16, 18 y 21 por medio de la técnica de QF-PCR con fines diagnósticos.Para ello, se sintetizaron diez pares de cebadores, cuatro para el cromosoma 21, dos para el cromosoma 13, dos para el cromosoma 18 y dos para el cromosoma 16. Los cuales se amplificaron mediante tres PCRs múltiples, que contienen los diez sistemas STRs estudiados.Se evaluó un total de 37 muestras biológicas, distribuidas de la siguiente manera: 26 líquidos amnióticos, 08 vellosidades coriónicas y 03 tejidos fetales. Del total de las muestras, 28 resultaron ser fetos no afectados (76%). Se detectaron 9 anomalías cromosómicas, 05 trisomías en el cromosoma 21 (13%), 02 trisomías en el cromosoma 13 (5%), 01 trisomía en el cromosoma 18 (3%) y 01 poliploidía (3%). Estos resultados se correspondieron en su totalidad a los encontrado mediante el estuche comercial Devyser® o cariotipo.La estandarización de la QF-PCR de forma manual logró disminuir los costos del diagnóstico en un 95%, en comparación con los estuches comerciales y demostró ser una técnica, fiable, rápida y de fácil análisis, que permite el diagnóstico de aneuploidías en muestras de líquido amniótico, vellosidades coriónicas y restos abortivos. Palabras clave: QF-PCR, estandarización, aneuploidías, diagnóstico prenatal.