Purificación y antigenicidad de una proteína recombinante de Trypanosoma cruzi obtenida mediante sustracción con Trypanosoma rangeli

Abstract

RESUMEN Trypanosoma cruzi es el agente etiológico de la enfermedad de Chagas, una patología difundida desde México hasta el cono sur. Debido a los problemas de sensibilidad y sobretodo de especificidad en el diagnóstico serológico de la enfermedad de Chagas, particularmente con relación a la infección con Trypanosoma rangeli, surge la necesidad de desarrollar herramientas que permitan la detección inequívoca del parásito especialmente en la fase crónica de la enfermedad, en la cual los parásitos son prácticamente indetectables de manera directa. Por ello, esta tesis estuvo orientada a la purificación de una proteína antigénica y específica de T. cruzi llamada Cm81.Esta proteína es codificada por un gen obtenido previamente mediante sustracción con T. rangeli, pertenece a la familia MASP y se expresa mayormente en la fase de tripomastigote. Para su purificación se procedió a la transformación de una cepa bacteriana con un vector de expresión con etiqueta de histidina ligado a un inserto obtenido por PCR con cebadores específicos de la familia MASP, se indujo su expresión con IPTG y se purificó la proteína recombinante por cromatografía de afinidad por metales. La electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS, reveló una proteína purificada de aproximadamente 28 kDa. El ensayo de dot blot, usando una mezcla de suero de pacientes chagásicos como anticuerpo primario, permitió detectar una interacción antígeno-anticuerpo, aunque con una débil señal. De esta manera se logró expresar una proteína MASP recombinante de T. cruzi y confirmar su antigenicidad con sueros de pacientes chagásicos. El hecho de que esta proteína no se expresa en T. rangeli, la convierte en un candidato ideal para el desarrollo de inmunoensayos específicos para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. Palabras clave: T. cruzi, MASP, inmunoensayo, expresión, purificación, proteína.