Desarrollo de una prueba de PCR basada en el ADNK, para la identificación de especies en el subgénero viannia en el diagnóstico de la leishmaniosis cutánea americana

Abstract

Resumen La leishmaniosis es una enfermedad parasitaria desencadenada por especies del género Leishmania, afectando la salud pública a nivel mundial y al menos de 22 países en América. Las manifestaciones clínicas: leishmaniosis cutánea (LC) y la leishmaniosis muco-cutánea (LMC) en Latinoamérica, son originadas por las especies del subgénero Viannia, las cuales tienen como vectores a mosquitos del género Lutzomyia. En las medidas de control y tratamiento existen problemas como la evidente diferencia en la respuesta clínica del paciente frente a las drogas, de acuerdo a la especie infectante, impulsando a desarrollar mejores métodos de diagnóstico de esta enfermedad. En este sentido, se ha recomendado el empleo de las técnicas de PCR basadas en ADN de kinetoplasto, como método de diagnóstico molecular para identificar al parásito con propósitos clínicos y epidemiológicos. El proyecto propuso: el desarrollo de una prueba de PCR ADNk que discriminara a nivel del subgénero Viannia e incluirla en el diseño de un flujograma de evaluación de muestras clínicas para el diagnóstico de la LC y LMC, donde se emplearon diferentes aproximaciones moleculares que permitieron la identificación del parásito a nivel de género, subgénero, complejo y especie. Esta aproximación fue incluida en el proceso diagnóstico de un grupo de pacientes provenientes de un brote reciente de leishmaniosis en el estado Cojedes. El análisis in sílico de la especificidad de los oligonucleótidos LeishF3/LeishB3, el diseño y normalización del PCR ADNk – RFLP, y la aplicación del flujograma en la identificación de siete muestras de pacientes diagnosticados con LC, conllevaron a que se lograse identificar la infección por Leishmania (V) braziliensis en estas últimas.