Identificación de Blastocystis hominis en aguas de consumo humano mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Abstract

Con la finalidad de identificar la presencia de Blastocystis spp. En aguas de consumo humano, se analizaron 33 muestras de agua, provenientes de 29 viviendas y 4 escuelas de la Parroquia San Juan, Sector El Atlántico, Caracas. Los sedimentos de agua post-filtración fueron analizados mediante métodos parasitológicos (examen directo y cultivo) y PCR. Previamente se estandarizó una PCR para amplificar el ADN de la pequeña sub unidad de ARN ribosomal, específico para Blastocystis, de acuerdo a propuesta de Stensvol y col (2006), que amplifica un fragmento de 310 pb. La PCR mostró una sensibilidad de 0,1 mg/mL y especificidad de 100% para Blastocystis spp. En los 33 sedimentos post-filtración analizados, se observó estructuras con morfología compatible con quistes o formas vegetativas de Blastocystis sp., en un 42,4% (14/33) mediante examen directo y/o cultivo. Mediante la PCR de 310 pb, sólo 7 muestras resultaron con un amplificado muy débil, realizándole posteriormente un PCR anidado. En esta técnica se amplificó inicialmente el ADN con una PCR de 1780 pb y luego el producto se amplificó con la PCR de 310 pb, encontrando una positividad franca en 85,6% (6/7). La baja sensibilidad de la técnica de PCR de 310 pb, frente a la técnica de PCR anidado, fue significativa. Se observó diferencias entre el análisis de las aguas mediante los métodos parasitológicos directo y cultivo, versus la detección mediante PCR, lo cual podría deberse a razones técnicas, fallas en la preservación de las formas evolutivas o la escasa cantidad de Blastocystis en el agua, por lo tanto se recomienda cultivar los sedimentos para aumentar el número de formas evolutivas de Blastocystis, preservar el mismo directamente en el buffer de lisis a -20 °C, y la extracción inmediata del ADN y preservardo a -20 °C hasta la realización de la técnica de PCR-j.